应用前景广阔技术有待升级产品评估严格

admin 2周前 (05-13) 健康 15 0

□ 刘容枝

肿瘤液体活检的检测靶标主要包括循环肿瘤DNA(ct DNA)、循环肿瘤细胞(CTC)和外泌体等。其中,ctDNA基础研究近年来取得了较大进展,相关检测试剂相继获批上市。然而,该检测靶标在临床应用中仍有诸多技术问题尚待攻克。本文介绍ct DNA的生物学特性和研究进展,分析其检测应用面临的技术挑战,并概述对相关检测试剂的审评思考。

临床应用前景可期

在生理或病理状态下,细胞发生坏死或凋亡时,细胞核内或线粒体内的DNA会释放到血液、胸腔积液、脑脊液、尿液和痰液等体液中。循环游离DNA(cfDNA)是细胞外DNA的降解产物,片段大小约为150bp~200bp。健康人体的cfDNA浓度通常低于100μg/L,平均约为30μg/L;而中晚期肿瘤患者体内cf DNA浓度可高达1000μg/L,平均约为180μg/L。

ctDNA是cfDNA家族中的一类,来源于肿瘤细胞,主要由单链或双链DNA以及单链与双链DNA的混合物组成,可反映肿瘤的异质性。目前,关于ctDNA释放的确切机制尚不明确。在健康人体中,ctDNA的水平很低;而对于肿瘤患者,可检测到较高水平的ctDNA,且其体内的ctDNA比例与肿瘤负荷呈正相关。ctDNA在cfDNA中的占比较低,中晚期肿瘤患者体内该比例约为8%~10%;在肿瘤早期或治疗缓解后,该比例低至0.01%~1.7%。此外,血液中ctDNA半衰期为15分钟至数小时。

ctDNA的水平可反映患者体内肿瘤的全景数据,能够全面反映与肿瘤组织相同的突变基因组信息(包含突变、缺失、插入、重排、拷贝数异常以及甲基化等相关突变信息)。此外,有研究表明,通过检测患者体内ctDNA的水平,可获取肿瘤的相关踪迹信息。由此可见,ctDNA检测在肿瘤筛查、早期诊断、微小残留病灶和复发监测、疗效评价、指导靶向药物使用以及生存评估等领域均具有良好的临床应用前景。需要关注的是,目前ctDNA尚处于小范围研究阶段,不同研究文献得到的结果存在差异,因此仍需要开展大量的实验和详细的数据分析,方可充分验证ct DNA作为肿瘤临床生物标志物的可靠性。

技术瓶颈有待突破

低丰度ctDNA对于检测技术的灵敏度要求很高。目前,在该领域基础研究中,常用的检测技术包括突变扩增阻滞系统(ARMS)、数字PCR(dPCR)以及新一代测序(NGS)等,各种方法的检测原理、灵敏度、特异性和通量等各不相同。对于ARMS和dPCR技术,不同方法间的检测差异与样本处理、提取效率、引物位置和探针修饰等有关;对于NGS技术,检测灵敏度除了与样本处理有关以外,还与每一步反应的效率和测序深度有关。

当前,尽管ctDNA可作为一种较为理想的肿瘤液体活检检测靶标,但其在实际检测应用中仍存在许多技术问题,包括样本处理、检测的标准化、灵敏度、特异性、阳性预测值和临床适用性等。例如,针对不同种类及不同时期的肿瘤,目前尚无样本采集、ctDNA提取以及扩增的标准流程。再例如,体液中ctDNA会被巨噬细胞实时清除,从而导致体液内含量极低,但目前大多数ctDNA研究集中于具有相对高浓度ctDNA的晚期癌症,而缺乏对于具有相对低浓度ctDNA的早期癌症的详细检测经验。此外,ctDNA检测有时会出现一定程度的假阴性或假阳性,主要原因是肿瘤具有异质性,即原发肿瘤、转移性肿瘤、ctDNA三者之间存在差异。并且,由于肿瘤组织和ctDNA的检测标准不一致,不同研究给出的一致性数据差异通常较大。

申博声明:该文看法仅代表作者自己,与本平台无关。转载请注明:应用前景广阔技术有待升级产品评估严格

网友评论

  • (*)

最新评论

站点信息

  • 文章总数:5496
  • 页面总数:0
  • 分类总数:8
  • 标签总数:3468
  • 评论总数:3183
  • 浏览总数:1100668